Chromatografia

Chromatografia je fyzikálno-chemická separačná metóda. Jej podstatou je rozdeľovanie zložiek zmesi medzi dvoma fázami: nepohyblivou (stacionárnou) a pohyblivou (mobilnou). Samotná separácia je dôsledkom rozdielnej afinity jednotlivých zložiek ku týmto dvom fázam. Stacionárna a mobilná fáza sa od seba odlišujú niektorou základnou fyzikálno-chemickou vlastnosťou, napr. polaritou.

Znázornenie Cvetovho pokusu. 1 — extrakt rastlinných farbív v petroléteri; 2 — čistý petroléter; 3 — stacionárna fáza (uhličitan vápenatý); 4 — sklená kolóna; A, B, C — zložky separovanej zmesi

Zakladateľom chromatografie je ruský botanik M. S. Cvet. V roku 1901 sa pokúsil rozdeliť petroléterový extrakt rastlinných farbív — chlorofylov a karotenoidov. Uskutočnil to pomocou stĺpcovej adsorpčnej chromatografie. Ako stacionárnu fázu (adsorbent) použil čistý, jemne mletý uhličitan vápenatý (CaCO₃). Mobilnou fázou bol už spomenutý petroléter.

Cvet najprv zhotovil sklenú kolónu, ktorú naplnil adsorbentom. Na čelo tejto kolóny postupne privádzal extrakt farbív (vzorku) a súčasne privádzal aj čistý petroléter. Po určitom čase sa jednotlivé zložky v kolóne oddelili a ďalším premývaním boli postupne eluované (opúšťali kolónu). Cvet takto získal oddelené petroléterové roztoky všetkých farbív (eluáty), ktoré boli predtým v zmesi.

Rozdelenie chromatografických techník

Chromatografické metódy sa dajú klasifikovať z rôznych hľadísk:

Z hľadiska mobilnej fázy

• plynová chromatografia (gas chromatography — GC)
• kvapalinová chromatografia (liquid chromatography — LC)

Z hľadiska mechanizmu separácie

• adsorpčná chromatografia chromatografia — prebieha adsorpcia zložiek na stacionárnej fáze
• rozdeľovacia
• ionexová chromatografia — stacionárnu fázu tvorí ionex (vymieňač iónov)
• gélová chromatografia — stacionárnu fázu tvorí pórovitý gél
• afinitná chromatografia
• chirálna chromatografia

Z hľadiska usporiadania stacionárnej fázy

• chromatografia v plošnom usporiadaní
  • papierová chromatografia (paper chromatography — PC)
  • chromatografia na tenkej vrstve (thin layer chromatography — TLC)
• kolónová chromatografia (niekedy tiež stĺpcová) — stacionárna fáza má tvar stĺpca

Z hľadiska cieľa chromatografie

• analytická chromatografia — cieľom je získať informáciu o zložení zmesi, ktorá bola chromatografovaná
• preparatívna chromatografia — cieľom je izolovať jednu alebo viac zložiek zo zmesi, ktorá bola chromatografovaná

Z hľadiska vyhodnocovacej techniky

• elučná chromatografia
• frontálna chromatografia
• vytesňovacia chromatografia

Chromatografia je vždy spojená s určitou detekčnou technikou.

Chemický portál